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足彩6场半全场胜负平:霉菌和酵母計數(征求意見稿)


錄入時間:2016-3-8 16:17:37 來源:青島海博生物

6场半全场开奖总汇 www.eknyoa.com.cn 1  范圍

    本標準規定了食品中霉菌和酵母(moulds and yeasts)的計數方法。

    本標準適用于各類食品中霉菌和酵母的計數。

2  設備和材料

除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下:

2.1  培養箱:2±1 。

2.2  拍擊式均質器及均質袋。

2.3  電子天平:感量0.1 g。

2.4  無菌錐形瓶容量500 mL。

2.5  無菌吸管:1 mL(0.01 mL刻度)、10 mL(0.1 mL刻度)。

2.6  無菌試管: 18 mm×180 mm。

2.7  旋渦混合儀。

2.8  無菌平皿:直徑90 mm。

2.9  恒溫水浴箱:46 ±1 。

2.10  顯微鏡:10×。

3  培養基和試劑

3.1  生理鹽水:見附錄AA.1。

3.2  馬鈴薯葡萄糖瓊脂:見附錄AA.2。

3.3  孟加拉紅瓊脂:見附錄AA.3。

4  檢驗程序

5  操作步驟

5.1  樣品的稀釋

5.1.1  固體和半固體樣品:稱取25 g樣品,加入225 mL稀釋液(水或生理鹽水),充分振搖,或用拍擊式均質器拍打2 min,制成1:10的樣品勻液。

5.1.2  液體樣品:以無菌吸管吸取25 mL樣品至盛有225 mL稀釋液(水或生理鹽水)的錐形瓶(可在瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠)或無菌均質袋中,充分振搖或用拍擊式均質器拍打2 min,制成1:10的樣品勻液。

5.1.3  1 mL 1:10樣品勻液注入含有9 mL無菌稀釋液的試管中,另換一支1 mL無菌吸管反復吹吸,或在旋渦混合儀上混勻,此液為1:100的樣品勻液。

5.1.4  5.1.3操作程序,制備10遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次,換用11 mL無菌吸管。

5.1.5  根據對樣品污染狀況的估計,選擇2個~3個適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),在進行10倍遞增稀釋的同時,每個稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液于2個無菌平皿內。同時分別取1 mL無菌稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照。

5.1.6  及時將20 mL25 mL冷卻至46 的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂可放置于46 ±1 恒溫水浴箱中保溫傾注平皿,并轉動平皿使其混合均勻。置水平臺面待培養基完全凝固。

5.2  培養

瓊脂凝固后,置平板,2±1 培養箱中培養,觀察并記錄,培養至第5 d的結果。

5.3  菌落計數

用肉眼觀察,必要時可用放大鏡或低倍鏡,記錄稀釋倍數和相應的霉菌和酵母菌落數。以菌落形成單位(colony-forming units,CFU)表示。

選取菌落數在10 CFU150 CFU的平板,根據菌落形態分別計數霉和酵母。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為菌落蔓延。

6  結果與報告

6.1  結果

6.1.1 計算同一稀釋度的兩個平板菌落數的平均值,再將平均值乘以相應稀釋倍數。

6.1.2 有兩個稀釋度平板上菌落數均10 CFU150 CFU之間,則按照GB 4789.2的相應規定進行計算。

6.1.3  若所有平板上菌落數均大于150 CFU,則對稀釋度最高的平板進行計數,其他平板可記錄為多不可計,結果按平均菌落數乘以最高稀釋倍數計算。

6.1.4  若所有平板上菌落數均小于10 CFU,則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

6.1.5  若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長,則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。

6.2  報告

6.2.1  菌落數按舍五入”原則修約。菌落數在10以內時,采用一位有效數字報告;菌落數在10100之間時,采用兩位有效數字報告。

6.2.2  菌落數大于或等于100時,前第3位數字采用四舍五入原則修約后,取前2位數字,后面用0代替位數來表示結果;也可用10的指數形式來表示,此時也按四舍五入原則修約,采用兩位有效數字。

6.2.3 若空白對照平板上有菌落出現,則此次檢測結果無效。

6.2.4  稱重取樣以CFU/g為單位報告,體積取樣以CFU/mL為單位報告,報告或分別報告霉菌和/或酵母數。


附  錄A

培養基和試劑

A.1  生理鹽水

A.1.1  成分

      氯化鈉                            8.5 g

      蒸餾水                           1 000 mL

A.1.2  制法

    氯化鈉1000 mL蒸餾水,攪拌至完全,分裝后,121 ℃滅菌20 min,備用。

A.2  馬鈴薯葡萄糖瓊脂

A.2.1  成分

      馬鈴薯(去皮切塊)                  300 g

      葡萄糖                           20.0 g

      瓊脂                             20.0 g

      氯霉素                            0.1 g

      蒸餾水                           1 000 mL

A.2.2  制法

    將馬鈴薯去皮切塊,加1000 mL蒸餾水,煮沸10 min20 min。用紗布過濾,補加蒸餾水至1000 mL。加入葡萄糖和瓊脂,加熱溶,分裝后,121 ℃滅菌20 min,備用。

A.3  孟加拉紅瓊脂

A.3.1  成分

      蛋白胨                            5.0 g 

      葡萄糖                            10.0 g

      磷酸二氫鉀                        1.0 g

      硫酸鎂(無水)                    0.5 g

      瓊脂                              20.0 g

      孟加拉紅                          0.033 g

      氯霉素                            0.1 g

蒸餾水                            1 000 mL

A.3.2  制法

上述各成分加入蒸餾水中,加熱溶解,補足蒸餾水至1 000 mL,分裝后,121℃滅菌20 min,避光保存備用。


附  錄B

霉菌直接鏡檢計數法

    常用的為郝氏Howard霉菌計測法,本方法適用于番茄醬罐頭、番茄汁。

B.1  設備和材料

B.1.1  折光儀。

B.1.2  顯微鏡。

B.1.3  郝氏計測玻片:具有標準計測室的特制玻片。

B.1.4  蓋玻片。

B.1.5  測微器:具標準刻度的玻片。

B.2  操作步驟

B.2.1  檢樣的制備:取定量檢樣,加蒸餾水稀釋至折光指數為1.34471.3460(即濃度為7.9%8.8%),備用。

B.2.2  顯微鏡標準視野的校正:將顯微鏡按放大率90125倍調節標準視野,使其直徑為1.382mm。

B.2.3  涂片:洗凈郝氏計測玻片,將制好的標準液,用玻璃棒均勻的攤布于計測室,加蓋玻片,以備觀察。

B.2.4  觀測:將制好之載玻片于顯微鏡標準視野下進行觀測。一般每一檢樣每人觀察50個視野。同一檢樣應由兩人進行觀察。

B.2.5  結果與計算:在標準視野下,發現有霉菌菌絲其長度超過標準視野(1.382 mm1/6或三根菌絲總長度超過標準視野的1/6(即測微器的一格)時即記錄為陽性(),否則記錄為陰性(。

B.2.6  報告:報告每100個視野全部陽性視野數為霉菌的視野百分數(視野%)。

 

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